LEKCJA nr 1
ROZDZIAŁ: CYTOLOGIA
TEMAT : „URZĄDZENIE MIKROSKOPÓW ŚWIETLNYCH I TECHNIKI MIKROSKOPOWE.”
Forma organizacji procesu edukacyjnego: lekcja praktyczna.
Lokal: sala szkoleniowa.
Cel lekcji: W oparciu o wiedzę z budowy mikroskopu świetlnego opanować technikę mikroskopii i przygotowania preparatów tymczasowych.
Znaczenie badanego tematu
Mikroskopia świetlna jest jedną z obiektywnych metod w dyscyplinach biologicznych, biomedycznych i medycznych. Umiejętność prawidłowego posługiwania się mikroskopem, umiejętna ocena, interpretacja, dokumentacja (szkic) obserwowanego obrazu mikroskopowego jest warunkiem pomyślnego opanowania materiału na zajęciach praktycznych z biologii, histologii, anatomii patologicznej i mikrobiologii.
W wyniku odbycia zajęć praktycznych student musi
wiedzieć:
· urządzenie z mikroskopem świetlnym;
· zasady pracy z mikroskopem świetlnym.
móc:
· pracować z mikroskopem świetlnym przy małym i dużym powiększeniu;
· przygotować preparat tymczasowy;
· sporządzać szkice preparatów mikroskopowych;
· sporządzić protokół lekcji.
Wyposażenie lekcji:
Komputer;
Projektor;
Prezentacja Power Point na ten temat;
mikroskop świetlny;
Obuoczny;
Mikropróbki (dowolne);
Slajdy;
Szklanki nakrywkowe;
szalki Petriego;
Skalpel;
Serwetki z gazy;
Bibuła filtracyjna;
Alkoholowy roztwór jodu;
Żarówka.
PRAKTYCZNA CZĘŚĆ ZAJĘĆ
ZADANIE nr 1. URZĄDZENIE MIKROSKOP ŚWIETLNY.
Zadanie 1:
- przeczytaj uważnie treść pracy nr 1 i przestudiuj budowę mikroskopu świetlnego.
Rozważ główne części mikroskopu: mechaniczne, optyczne, oświetleniowe.
DO część mechaniczna należą: statyw, scena, tuba, rewolwer, śruby makro- i mikrometryczne.
Statyw składa się z masywnej podstawy w kształcie podkowy, która zapewnia mikroskopowi niezbędną stabilność. Od środka podstawy wystaje w górę wygięty niemal pod kątem uchwyt tuby, do którego przymocowana jest ukośnie umieszczona tuba.
Stół przedmiotowy z okrągłym otworem pośrodku jest zamontowany na statywie. Przedmiot, o którym mowa, kładzie się na stole (stąd nazwa „obiekt”). Na stole znajdują się dwa zaciski lub zaciski, które mocno mocują lek. Po bokach stołu znajdują się dwie śruby - ekstraktory leków, po obróceniu stół przesuwa się wraz z soczewką w płaszczyźnie poziomej. Wiązka światła przechodzi przez otwór pośrodku stołu, umożliwiając oglądanie obiektu w świetle przechodzącym.
Po bokach statywu, pod sceną, znajdź dwie śruby, które służą do przesuwania tuby. Śruba makrometryczna, czyli grzechotka, ma duży dysk i po obróceniu podnosi lub opuszcza tubus w celu przybliżonego ogniskowania. Śruba mikrometryczna, posiadająca zewnętrzną tarczę o mniejszej średnicy, przy obrocie lekko przesuwa tubus i służy do precyzyjnego ogniskowania. Śruba mikrometryczna może być obracana tylko o pół obrotu w obu kierunkach.
Część optyczna mikroskop jest reprezentowany przez okulary i obiektywy.
Okular (od łacińskiego oculus – oko) znajduje się w górnej części tubusu i jest skierowany w stronę oka. Okular to układ soczewek zamkniętych w cylindrycznej, metalowej tulei. Po liczbie na górnej powierzchni okularu można ocenić jego współczynnik powiększenia (X 7, X 10, X 15). Okular można wyjąć z tubusu i w razie potrzeby wymienić na inny.
Po przeciwnej stronie znajdź obrotową płytkę, czyli rewolwer (od łacińskiego revolvo – obracam), który posiada 3 gniazda na soczewki. Podobnie jak okular, soczewka jest układem soczewek zamkniętych we wspólnej metalowej ramce. Obiektyw wkręcany jest w gniazdo rewolweru. Soczewki mają także różne współczynniki powiększenia, które są oznaczone liczbą na ich bocznej powierzchni. Wyróżnia się soczewkę o małym powiększeniu (X 8), soczewkę o dużym powiększeniu (X 40) oraz soczewkę immersyjną służącą do badania najmniejszych obiektów (X 90).
Całkowite powiększenie mikroskopu jest równe powiększeniu okularu pomnożonemu przez powiększenie obiektywu. Zatem mikroskop świetlny ma maksymalne powiększenie 15 x 90 lub może powiększyć maksymalnie 1350 razy.
Część oświetleniowa Mikroskop składa się z lustra, kondensora i przysłony.
Lustro mocowane jest na statywie pod sceną, a dzięki ruchomemu mocowaniu można je obracać w dowolnym kierunku. Umożliwia to wykorzystanie źródeł światła rozmieszczonych w różnych kierunkach względem mikroskopu i skierowanie wiązki światła na obiekt poprzez otwór w stoliku. Lustro ma dwie powierzchnie: wklęsłą i płaską. Wklęsła powierzchnia mocniej skupia promienie świetlne i dlatego stosowana jest przy słabszym, sztucznym oświetleniu.
Kondensor znajduje się pomiędzy lustrem a sceną i składa się z dwóch lub trzech soczewek zamkniętych we wspólnej ramce. Wiązka światła rzucana przez zwierciadło przechodzi przez układ soczewek kondensora. Zmieniając położenie kondensora (wyżej, niżej) można zmieniać intensywność oświetlenia obiektu. Do przesuwania kondensatora służy śruba znajdująca się przed śrubami makro i mikro. Gdy kondensor jest opuszczony, oświetlenie maleje; gdy jest podniesiony, wzrasta. Do regulacji oświetlenia służy także przesłona zamontowana w dolnej części skraplacza. Przysłona ta składa się z szeregu płytek ułożonych w okrąg i częściowo zachodzących na siebie w taki sposób, że w środku znajduje się otwór umożliwiający przejście wiązki światła. Za pomocą specjalnego uchwytu umieszczonego po prawej stronie kondensora można zmieniać położenie płyt membran względem siebie i tym samym zmniejszać lub zwiększać otwór, a co za tym idzie regulować natężenie oświetlenia.
Zadanie 2:
- Po zapoznaniu się z treścią pracy nr 1 i rysunku 1, w zeszycie ćwiczeń prawidłowo oznacz odpowiednie części mikroskopu numerami od 1 do 11.
Zadanie 3:
- W zeszycie ćwiczeń podaj pisemne odpowiedzi na pytania dotyczące samokontroli.
Pytania do samokontroli:
- Które części mikroskopu świetlnego są mechaniczne?
- Które części mikroskopu świetlnego należą do części optycznej?
- Które części mikroskopu świetlnego należą do części oświetleniowej?
- Proszę o wskazanie jakie powiększenie mogą mieć soczewki powiększające?
- Proszę o informację jaką moc powiększenia mogą mieć te okulary?
- Jak nazywa się obiektyw z powiększeniem x90?
- Jaką moc powiększenia ma soczewka o „dużym” powiększeniu?
- Jak znaleźć całkowity współczynnik powiększenia mikroskopu?
- Jaka jest rola kondensatora?
- Do czego służy membrana?
- W jakich przypadkach stosuje się powierzchnię lustra wklęsłego?
PRACA nr 2. TECHNIKI MIKROSKOPOWE I ZASADY PRACY Z MIKROSKOPEM.
Zadanie 1:
- zapoznaj się dokładnie z treścią pracy nr 2;
- Zanotuj w zeszycie ćwiczeń technikę mikroskopii i zasady pracy z mikroskopem.
1. Umieść mikroskop na krawędzi stołu, naprzeciw lewego ramienia. Po prawej stronie umieść otwarty album do ćwiczeń praktycznych. Wytrzyj okular gazikiem. Obróć zwierciadło mikroskopu wklęsłą stroną w stronę źródła światła.
2. Doprowadź mikroskop do stanu roboczego:
· zainstaluj soczewkę o małym powiększeniu w odległości 1-1,5 cm od sceny;
podnieś skraplacz do granic możliwości;
· patrząc jednym okiem w okular, nie zasłaniając drugiego, równomiernie i intensywnie rozświetlaj lustrem pole widzenia;
3. Umieścić preparat na stoliku mikroskopu szkiełkiem nakrywkowym skierowanym do góry (zwróć na to uwagę). Przesuń preparat kciukiem i palcem wskazującym za żebro, aby znaleźć miejsce do badania; Środkowy palec powinien spoczywać na scenie.
4. Opuść kondensor do pozycji zapewniającej najlepsze oświetlenie preparatu przy małym powiększeniu.
5. Zbadaj preparat przy użyciu obiektywu 8x lub 10x (małe powiększenie). Znajdź miejsce odpowiednie do nauki przy dużym powiększeniu, umieść je w środku pola widzenia i wyreguluj ostrość obrazu za pomocą mikrośruby.
6. Przy zmianie powiększenia z małego na duże należy bez zmiany ogniskowej obrócić obrotową płytkę obiektywu aż do kliknięcia, tak aby soczewka 40x (duże powiększenie) znalazła się w pozycji roboczej. Aby uzyskać ostry obraz, użyj mikrośruby. Używanie makrośruby przy dużym powiększeniu jest zabronione, gdyż preparat może łatwo zostać zmiażdżony.
7. Lewa ręka powinna znajdować się na śrubie mikrometrycznej, obracając ją lekko w obu kierunkach, aby zobaczyć szczegóły cięcia leżące na różnych głębokościach ciętej powierzchni.
8. Po zrozumieniu położenia przestrzennego, proporcji i relacji szczegółów badanego obiektu rozpocznij szkicowanie.
9. Zabrania się wyjmowania leku spod soczewki o dużym powiększeniu. W celu zdjęcia preparatu ze stolika mikroskopu należy w pozycji roboczej ustawić soczewkę o małym powiększeniu i zdjąć preparat ze stolika mikroskopu.
10. Nie odkręcaj żadnej części mikroskopu. Jeżeli mikroskop działa nieprawidłowo, skontaktuj się z nauczycielem. .
Zadanie 2:
· przygotować mikroskop do pracy zgodnie z powyższymi zasadami pracy z mikroskopem określonymi w punktach 1-2;
· uzyskać od nauczyciela mikroslajd (dowolny);
· uzyskać ostry obraz najpierw przy małym, a następnie przy dużym powiększeniu mikroskopu zgodnie z paragrafami 3-7 zasad pracy z mikroskopem;
· po zbadaniu mikropróbki należy ją prawidłowo wyjąć z mikroskopu, zgodnie z paragrafem 9 zasad pracy z mikroskopem.
PRACA nr 3. TECHNIKI PRZYGOTOWANIA PREPARATÓW TYMCZASOWYCH
Zadanie 1:
- zapoznaj się dokładnie z treścią pracy nr 3;
- przygotować tymczasowe rozwiązanie.
Wyjmij szkiełko z szalki Petriego, trzymając je za boki i połóż na stole. Od kawałka cebuli oddziel mięsistą łuskę. Po wewnętrznej stronie znajduje się cienka folia. Usuń go pęsetą i odetnij kawałek folii o wielkości kilku milimetrów kwadratowych. Kawałek ten należy umieścić na szkiełku, odpipetować roztwór jodu, upuścić kroplę jodu na kliszę i przykryć szkiełkiem nakrywkowym (pamiętaj, aby trzymać je za boczne krawędzie, aby nie pozostawić odcisków palców).
Zadanie 2:
· przeczytaj poniższy opis zdjęcia mikroskopowego preparatu tymczasowego;
· uzyskać obraz preparacji tymczasowej przy małym powiększeniu i obejrzeć go;
· uzyskać obraz preparacji tymczasowej w dużym powiększeniu i obejrzeć go.
Obejrzyj preparat przy małym powiększeniu. Okaz przedstawia grupę komórek o wydłużonym, niemal prostokątnym kształcie. Duże, okrągłe, owalne jądra w komórkach zabarwiają się pod wpływem jodu na żółto-brązowo. Ustaw soczewkę na duże powiększenie i znajdź dwuobwodową membranę komórkową. Zwróć uwagę na jego grubość. Dokładne badanie cytoplazmy komórki ujawnia jej ziarnistą strukturę. Jądro zwykle zajmuje centralne miejsce w komórce. Czasami jest przesunięty w stronę muszli i przybiera spłaszczony kształt. W jądrze widać 1-2 jąderka. Niezabarwione puste przestrzenie w cytoplazmie komórek to wakuole.
Zadanie 3:
· w zeszycie ćwiczeń naszkicuj obraz mikroskopowy tymczasowego preparatu komórek łusek cebuli, po wcześniejszym zapoznaniu się z przykładowym szkicem i treścią pracy nr 4.
Naszkicuj kilka komórek. Liczba powinna wskazywać: 1) jądro 2) cytoplazmę; 3) powłoka dwuobwodowa.
PRZYKŁADOWY PROJEKT SZKICÓW:
Przygotowanie: Skórka cebuli.
Niezbędnym warunkiem uzyskania wyraźnego, ostrego i wyraźnego obrazu obiektu mikroskopowego jest, jak już wspomniano, prawidłowy montaż oświetlenia oraz właściwy dobór okularów i soczewek.
Aby ustalić prawidłowe oświetlenie: podczas pracy ze światłem dziennym otwórz przysłonę irysową, podnieś kondensor do poziomu stolika i uchwyć najlepsze oświetlenie pola widzenia mikroskopu przy małym powiększeniu płaską stroną lustra; przy sztucznym oświetleniu kondensor obniża się tak, aby obraz źródła światła znajdował się w płaszczyźnie preparatu i był wyraźnie widoczny pod mikroskopem.
Podczas mikroskopii niezabarwionych preparatów kondensor instaluje się w sposób opisany powyżej, a przysłona irysowa jest lekko zwężona. Nadmierną jasność pola widzenia można także osłabić regulując natężenie światła żarówki oświetlacza, przesuwając uchwyt reostatu transformatora i stosując filtr światła lub obniżając kondensator. Należy pamiętać, że im wyżej podniesiony zostanie kondensor, tym jaśniej będzie oświetlone pole widzenia mikroskopu. Barwione slajdy są zwykle oglądane za pomocą soczewki olejowej. W takim przypadku kondensor należy podnieść maksymalnie, ponieważ mikroskopia z systemem zanurzeniowym wymaga szczególnie silnego oświetlenia.
Aby oglądać próbki przy różnych powiększeniach, stosuje się różne kombinacje okularów i soczewek. Wybór pożądanego powiększenia zależy od obiektu pod mikroskopem, celów badania i zdolności rozdzielczej mikroskopu. Przez zdolność rozdzielczą mikroskopu rozumie się najmniejszą odległość między dwoma punktami próbki, której obraz można wyraźnie rozróżnić pod mikroskopem. Im mniejsza jest ta odległość, tym większa jest zdolność rozdzielcza mikroskopu. Granica rozdzielczości mikroskopu optycznego wynosi 0,2 mikrona – połowa długości fali widma widzialnego. Wynika to z falowej natury światła. Im większa krzywizna soczewek obiektywowych (im jest mocniejsza), tym mniejsze obiekty można przez nią zobaczyć.
Soczewki systemu suchego mają niższą rozdzielczość niż soczewki immersyjne. Zatem soczewka o natywnym powiększeniu 40X umożliwia oglądanie obiektów o wielkości co najmniej 0,85 mikrona. Obiektyw olejowy 90X konwencjonalnego mikroskopu biologicznego pozwala widzieć obiekty o wielkości zaledwie 0,45 mikrona. W najlepszych współczesnych mikroskopach optycznych rozdzielczość obiektów zanurzeniowych jest doprowadzana do granic możliwości. Okulary nie ujawniają nowych szczegółów w budowie komórek drobnoustrojów: zwiększają obraz otrzymywany z soczewki, dzięki czemu można zobaczyć większy preparat, im mocniejszy okular. Dlatego podczas mikroskopii komórek drożdży i pleśni (jako dość dużych obiektów) można użyć obiektywu 40X. Do badania bakterii należy użyć obiektywu immersyjnego 90X. W obu przypadkach można zastosować dowolne okulary.
Proces mikroskopii rozpoczyna się od umieszczenia przygotowanej próbki na stoliku mikroskopowym i zaciśnięcia jej zaciskami. Obserwując z boku (oczy powinny znajdować się na poziomie stolika) tubus mikroskopu opuszcza się śrubą makrometryczną (cremalier) prawie do momentu zetknięcia się soczewki z szkiełkiem nakrywkowym, a soczewkę immersyjną zanurza się w kropli olejku cedrowego nałożonego na wysuszony, wybarwiony preparat.
Nie można obiektywu opuścić zbyt nisko, a tym bardziej docisnąć go do szkła, gdyż może to nie tylko zmiażdżyć szkiełko nakrywkowe (a nawet szkiełko szkiełkowe!), ale także uszkodzić przednią soczewkę obiektywu. W tym drugim przypadku obiektyw zawodzi. Podczas pracy z obiektywem immersyjnym należy zachować szczególną ostrożność podczas opuszczania tubusu mikroskopu, gdyż wolna przestrzeń robocza tego obiektywu wynosi zaledwie 0,15 mm.
Po opuszczeniu tubusu, patrząc w okular, zaczynają powoli obracać śrubę makrometryczną „do siebie”, aż w polu widzenia mikroskopu pojawią się kontury obiektu (zgrubne celowanie). Najczystszy i najostrzejszy obraz (ogniskowanie mikroskopu) uzyskuje się obracając śrubę mikrometryczną. Jednakże nie zaleca się obracania śruby mikrometrycznej o więcej niż jeden lub dwa pełne obroty w tym lub innym kierunku.
Jeżeli podczas obracania grzechotki obraz okaże się „przegapiony”, nie można patrząc przez okular szybko opuścić tubus mikroskopu poprzez odwrotny obrót, gdyż można zmiażdżyć szkiełko i uszkodzić soczewkę. W tym przypadku ponownie, patrząc z boku, należy ustawić obiektyw w pierwotnej pozycji i powtórzyć operację ustawiania ostrości od początku.
Po pracy olejek immersyjny usuwa się z obiektywu czystą szmatką, przednią soczewkę obiektywu przeciera się małym wacikiem lekko zwilżonym alkoholem (stosuje się również benzynę lotniczą) i ponownie przeciera suchą, czystą szmatką . Usunięcie olejku cedrowego z soczewki powinno być łatwe i bez nacisku. Mikroskop należy przechowywać w futerale lub przykryć pokrywą lub szklaną osłoną w celu ochrony przed kurzem.
1. Preparat umieszcza się na stoliku mikroskopowym i zabezpiecza bocznymi zaciskami.
2. Obróć rewolwer, aby zainstalować soczewkę o małym powiększeniu 8x.
3. Znajdź odpowiednie oświetlenie leku. W tym celu za pomocą płaskiego lustra lub lampy kierują światło ze źródła do kondensora mikroskopu, starając się uzyskać równomierne oświetlenie pola widzenia. Najlepsze oświetlenie wybiera się podnosząc lub opuszczając skraplacz i wykorzystując przysłonę.
4. Znajdź obraz przy małym powiększeniu (obiektyw 8x), ustawiając ostrość śrubą makrometryczną.
5. Nie podnosząc tubusu, obracając rewolwer, zmień soczewkę o małym powiększeniu (8x) na soczewki o większym powiększeniu (40x, 90x).
a) Podczas pracy ze średnim powiększeniem (obiektyw 40x) apertura kondensora jest lekko otwarta, aby poprawić oświetlenie. Ostrość za pomocą śruby mikrometrycznej.
b) Jeśli używasz obiektywu immersyjnego (90x), otwórz aperturę kondensora, aby zwiększyć światło. Na preparat nakłada się kroplę olejku imersyjnego (cedrowego). Następnie patrząc na preparat z boku (aby kontrolować, aby nie zmiażdżyć szkła i nie porysować przedniej soczewki obiektywu), bardzo ostrożnie zanurzamy soczewkę 90x w olejku niemal do momentu zetknięcia się z powierzchnią obiektywu. szkła, pracując ze śrubą makrometryczną. Następnie tubus bardzo powoli podnosi się za pomocą makrośruby, aż w polu widzenia pojawi się badany obiekt. Na koniec ostrość obrazu reguluje się śrubą mikrometryczną.
Zwyczajowo szkicuje się badane obiekty. W tym celu preparat umieszcza się w polu widzenia mikroskopu w pozycji najwygodniejszej do szkicowania, co osiąga się poprzez przesuwanie stolika. Szkic wykonany jest możliwie najdokładniej w odniesieniu do wielkości, kształtu, umiejscowienia komórek bakterii, drożdży, organów zarodnikujących grzybów nitkowatych itp.
Zasady posługiwania się mikroskopem
1. Mikroskop należy chronić przed kurzem tj. przechowywać w etui lub pod kapturem.
2. Nie zostawiaj mikroskopu na słońcu lub w pobliżu zapalonego palnika, ponieważ Balsam kanadyjski używany do sklejania soczewek może się stopić.
3. Po zakończeniu oglądania leku należy najpierw podnieść tubkę, a następnie wyjąć lek ze stołu.
4. Po zakończeniu pracy z mikroskopem, podniesieniu tubusu i ułożeniu soczewki w wygodnej pozycji, należy dokładnie przetrzeć przednią soczewkę czystą, miękką szmatką bawełnianą lub specjalną flanelą.
5. Szczególną uwagę zwraca się na soczewkę immersyjną, której olej z powierzchni usuwa się odpowiednią ściereczką zwilżoną oczyszczoną benzyną lub alkoholem.
Nie dopuścić do wyschnięcia oleju na soczewce..
6. Szczególną ostrożność należy zachować, gdy:
a) do śruby mikrometrycznej - nie wykonuj pełnych obrotów.
b) do obiektywu immersyjnego, gdyż ze względu na krótką ogniskową przedniej soczewki szkiełko z lekiem może zostać łatwo zgniecione, co może skutkować zarysowaniem soczewki.
Bakterie stanowią dużą grupę mikroorganizmów, przeważnie jednokomórkowych, różniących się kształtem, rozmiarem, względnym położeniem komórek, obecnością lub brakiem zarodników, wici, torebek itp. (ryc. 3,4).
Aby określić grupę lub rodzaj bakterii, przede wszystkim bada się ich cechy morfologiczne: kształty i kombinacje komórek, ich wielkość, ruchliwość, zdolność do tworzenia zarodników, stosunek do barwienia metodą Grama, obecność torebek i wtrętów komórkowych. Badanie cech morfologicznych bakterii zwykle przeprowadza się za pomocą mikroskopu optycznego.
Ryż. 3. Główne formy bakterii:
1-gronkowce; 2-3-diplokoki; 4-steptokoki; 5-tetrakoki; 6-Saraceni; 7-9 różnych rodzajów patyczków.
Ryż. 4. kapsułki, zarodniki i wici bakterii:
a-kapsułki; kształt b i lokalizacja zarodników; b-monotrichy; g-lofotrich;
d-peritrich.
Do badania bakterii pod mikroskopem przygotowuje się preparaty na szkiełku. Szkiełka szklane to cienkie płytki szklane (76x26 mm) z dobrze wypolerowanymi krawędziami. Wierzch preparatu przykryty jest szkiełkiem nakrywkowym. Ich rozmiary to 18x18, 20x20 mm itp. Wszystkie szklanki (szkielety i szkiełka nakrywkowe) muszą być całkowicie czyste i odtłuszczone. Szkło uważa się za czyste, jeśli woda łatwo rozprowadza się po powierzchni szkła, nie tworząc kulistych kropel.
Nowe szklanki czyści się przez 10 minut w 1% roztworze sody, następnie płucze wodą destylowaną, następnie słabym kwasem solnym i ponownie wodą destylowaną. Zużyte szkło moczy się w stężonym kwasie siarkowym, przemywa wodą, gotuje w 2% roztworze sody przez 10 minut, a następnie dokładnie myje wodą destylowaną.
Szklanki beztłuszczowe przechowywane są w zamkniętym, czystym pudełku i podczas użytkowania należy się z nimi obchodzić tak, aby nie dotykały ich powierzchni.
Mikroskopię bakterii można przeprowadzić badając je zarówno w stanie żywym, jak i martwym, w specjalnie przygotowanych wybarwionych preparatach. Te ostatnie są bardzo szeroko stosowane w praktyce, ponieważ Ze względu na zbyt mały rozmiar komórek bakteryjnych, w stanie żywym nie jest możliwe zbadanie niektórych szczegółów ich budowy (otoczki, wtręty, obecność zarodników), natomiast są one wyraźniej widoczne po zabarwieniu martwych komórek specjalnymi farbami.
Do wykrywania i badania mikroorganizmów, których używają mikroskopy świetlne różne modele („MBI-1”, „Biolam”, „Bimam”, „Mikmed”). Do badania mniejszych obiektów (wirusów) używają mikroskopy elektronowe.
Wszystkie mikroskopy są zaprojektowane tak samo i składają się z części mechanicznej i układu optycznego. Część mechaniczna składa się z podstawy statywu (1), stolika (2), uchwytu tubusu (3), rewolweru obiektywowego (4), makrośruby (5) do przesuwania tubusu, mikrośruby (6) do dokładnego ustawiania ostrości . Część optyczna mikroskopu składa się z soczewek (7), okularów (8) i urządzenia oświetleniowego (9). Soczewki to układ soczewek, z których jedna wytwarza powiększenie, a wszystkie pozostałe korygują obraz. Okulary składają się z dwóch soczewek (zbieżnej i ocznej). Powiększają obraz uchwycony przez obiektyw. Urządzenie oświetleniowe (lustro, przysłona irysowa i kondensor).
1. Preparat umieszcza się na stoliku mikroskopowym i zabezpiecza bocznymi zaciskami.
2. Obróć rewolwer, aby zainstalować soczewkę o małym powiększeniu 8x.
3. Znajdź odpowiednie oświetlenie leku. W tym celu za pomocą płaskiego lustra lub lampy kierują światło ze źródła do kondensora mikroskopu, starając się uzyskać równomierne oświetlenie pola widzenia. Najlepsze oświetlenie wybiera się podnosząc lub opuszczając skraplacz i wykorzystując przysłonę.
4. Znajdź obraz przy małym powiększeniu (obiektyw 8x), ustawiając ostrość śrubą makrometryczną.
5. Nie podnosząc tubusu, obracając rewolwer, zmień obiektyw o małym powiększeniu na obiektyw o dużym powiększeniu (40x, 90x).
6. Jeśli używasz obiektywu immersyjnego (90x), otwórz aperturę kondensora, aby zwiększyć światło. Na preparat nakłada się kroplę olejku imersyjnego (cedrowego). Następnie patrząc na preparat z boku (aby kontrolować, aby nie zmiażdżyć szkła i nie porysować przedniej soczewki obiektywu), bardzo ostrożnie zanurzamy soczewkę 90x w oleju niemal do momentu zetknięcia się z powierzchnią obiektywu. szkło, współpracując ze śrubą makrometryczną. Następnie tubus bardzo powoli podnosi się za pomocą makrośruby, aż w polu widzenia pojawi się badany obiekt. Na koniec ostrość obrazu reguluje się śrubą mikrometryczną.
Kiedy mikroskopia jest włączona ciemne pole promienie oświetlające obiekt nie dostają się do soczewki mikroskopu, pole widzenia pozostaje ciemne, a obiekt wydaje się świecić na tle. Efekt ciemnego pola tworzony jest za pomocą specjalnego kondensatora.
Za pomocą mikroskopii z kontrastem fazowym można badać bezbarwne, przezroczyste obiekty bez obróbki wstępnej. Aby pracować metodą kontrastu fazowego, oprócz konwencjonalnego mikroskopu biologicznego potrzebujesz specjalnego urządzenia. W tym celu skraplacz i soczewka są zastępowane fazowymi. Kondensator fazowy ustawia się na 0 poprzez obrócenie tarczy wieży. Ta pozycja odpowiada kondensatorowi pola świetlnego.
Nowoczesny mikroskop to precyzyjny przyrząd optyczny, który podczas pracy z nim wymaga ścisłego przestrzegania szeregu zasad. Mikroskop należy przechowywać w miejscu chronionym przed kurzem (pod przykryciem lub pod specjalną szklaną osłoną). Co jakiś czas warto sprawdzić czystość i stan optyki i przetrzeć ją jedynie od zewnątrz za pomocą szczoteczki do włosów lub miękkiej szmatki zwilżonej alkoholem. Raz w roku mikroskop powinien zostać sprawdzony i w razie potrzeby naprawiony przez mistrza optyka.
Technika mikroskopowa to zbiór technik i zasad obsługi i pracy z mikroskopem i jego częściami pomocniczymi.
Pracując z mikroskopem należy przede wszystkim chronić go przed zanieczyszczeniami (w przerwach między pracami przykrywać go szklaną lub tekturową nakrętką). Nie zaleca się częstego odkręcania soczewek: gwinty się poluzują i ich ustawienie zostanie zakłócone. Część optyczną wielokrotnie przeciera się dokładnie umytą, niezanieczyszczoną szmatką batystową lub lnianą, ślady zanieczyszczeń usuwa się wacikiem zwilżonym 95% alkoholem, a następnie przeciera suchym wacikiem. Olej usuwa się z powierzchni soczewki suchą, miękką szmatką, a jego pozostałości można usunąć ksylenem. Zdjąć z części mechanicznej urządzenia. Kompleksowe czyszczenie i smarowanie przeprowadza specjalista.
Praca z nowoczesnymi mikroskopami wymaga stosowania racjonalnego oświetlenia, starannego doboru układu optycznego „obiektyw – okular – kondensor”, a także szkiełek i nakrywek odpowiedniej jakości, odpowiedniego przygotowania preparatu – przedmiotu badań. Oświetlacze OI-7, OI-9, OI-18, OI-19 wyposażone w soczewkę zbierającą pełnią funkcję punktowych źródeł światła. Oświetlacz instaluje się w odległości 30-40 cm przed mikroskopem. Unikaj zbyt jasnego oświetlenia, ponieważ pogarsza to jakość obrazu. Po ustawieniu oświetlenia należy wyregulować aperturę kątową kondensora, całkowicie otwierając przysłonę aperturową i całkowicie zamykając przysłonę polową (kolektorową) i obserwując pod mikroskopem okrąg świetlny (otwór przesłony). Następnie przysłona jest stopniowo zwężana, aż w polu widzenia pojawi się plamka bez niebieskiej lub zielonej obwódki. Jakość obrazu zależy od racjonalnego użycia soczewek i okularów. Stosując różne kombinacje obiektywów i okularów, można uzyskać różne powiększenia. Jednak o wyborze pożądanego powiększenia powinien decydować przede wszystkim przedmiot, cel badania oraz rozdzielczość mikroskopu.
W bakterioskopii z reguły stosuje się obiektywy immersyjne (olej, woda, gliceryna). Aby uzyskać dobry obraz bez użycia szkiełka nakrywkowego, zaleca się użycie specjalnego olejku immersyjnego, którego kroplę nanosi się na rozmaz znajdujący się na szkiełku. Pracując z soczewką immersyjną należy bardzo ostrożnie opuścić tubus, aby nie uszkodzić przedniej soczewki obiektywu. Jakość obrazu zależy także od grubości szkiełka (nie więcej niż 1,1-1,4 mm) i szkła nakrywkowego (nie grubszego niż 0,15-0,17 mm).
Przyrządami pomocniczymi do mikroskopii są: stolik grzewczy, mikrometr okularowy, mikrometr obiektowy, przyrząd rysunkowy i mikromanipulator.
Zamiast stołu obiektowego instalowany jest stół grzewczy. Stopień nagrzania reguluje się za pomocą termostatu. Na takim stoliku osadza się preparat, podobnie jak na zwykłym stoliku mikroskopowym.
Mikrometr okularowy umożliwia pomiar obserwowanych obiektów. W tym celu soczewka skupia się na skali obiektowo-mikrometrycznej, której każdy podział wynosi 10 mikronów.
Ważną sekcją technologii mikroskopowej jest szkicowanie przedmiotu badań. Rysunek można wykonać wizualnie lub dokładniej za pomocą maszyny do rysowania. W metodzie wizualnej patrzy się w mikroskop lewym okiem, a prawym okiem śledzi ruch ołówka na papierze. Aparat ciągnący zamontowany jest na tubusie mikroskopu. Lustro rzuca obraz papieru i ołówka przez pryzmat, rysując w płaszczyźnie punktu ocznego okularu, w oku, dzięki czemu obserwator jednocześnie widzi przedmiot, papier i czubek ołówka.
Mikromanipulator umożliwia wykonywanie precyzyjnych ruchów mikroinstrumentów oraz wykonywanie niektórych operacji na komórce w polu mikroskopowym (usuwanie jąder, wstrzykiwanie różnych substancji, wycinanie różnych skrawków itp.). Składa się z układu stojaków wyposażonych w śruby mocujące mikronarzędzia, umożliwiające przemieszczanie się mikronarzędzi we wszystkich kierunkach.
Obiekty żywe () umieszcza się na szkiełku w kropli najbardziej odpowiedniego dla nich ośrodka (możliwy jest izotoniczny roztwór chlorku sodu) i przykryte szkiełkiem nakrywkowym () bada się w świetle przechodzącym w jasnym lub ciemnym polu . Utrwalone i wybarwione preparaty bakteryjne przygotowuje się w formie rozmazów lub odcisków (patrz: Barwienie mikroorganizmów).
Mikroskopia preparatów - patrz Mikroskopia. Zobacz także Mikroskop.
Technika mikroskopowa - zasady posługiwania się i pracy z mikroskopem i urządzeniami pomocniczymi.
Ważnym warunkiem powodzenia mikroskopii jest instalacja oświetlenia. Tylko przy optymalnym oświetleniu według Köhlera (ryc. 1) można wykorzystać wszystkie możliwości mikroskopu. Do montażu oświetlenia Kohlera niezbędny jest standardowy oświetlacz typu OI-7 (rys. 2) lub OI-19 z mikrolampą (z małą, ciasno skręconą spiralą), którą można przesuwać wzdłuż osi oświetlacza. W tym przypadku światło mikrolampy skupiane jest przez soczewkę kolektora, a w pewnej odległości od oświetlacza pojawia się ostry obraz spirali lampy. Powierzchnia obiektywu jest ograniczona przez zmienną przysłonę irysową. Ostry obraz spirali lampy kierowany jest przez zwierciadło mikroskopu na zamkniętą przysłonę kondensora, która jest systemem soczewek o dużej aperturze i krótkim ogniskowaniu, który zbiera cały wchodzący do niego strumień światła na bardzo mały obszar obiektu. Cały oświetlacz przesuwa się po stole, aż obraz spirali lampy pokryje całą przysłonę kondensora. Moment ten zauważa się patrząc od przodu na płaskie zwierciadło mikroskopu, w którym odbija się przysłona kondensora. W razie potrzeby lampę w oświetlaczu przesuwa się wzdłuż osi, aż obraz spirali osiągnie pożądany rozmiar, po czym przysłona kondensora zostaje całkowicie otwarta.
Ryż. 1. Schematyczne przedstawienie drogi promieni podczas oświetlania preparatu metodą Köhlera: 1 - żarnik lampy; 2 - kolektor; 3 - apertura polowa; 4 - obraz żarnika lampy w płaszczyźnie przysłony; 5 - przysłona aperturowa; c - skraplacz; Ryc. 7 - obraz krawędzi przesłony polowej w płaszczyźnie preparatu. 
Ryż. 2. Mikroskop MVI-1 z oświetlaczem OI-7.
Następnie preparat umieszcza się na stoliku mikroskopu i skupia na nim soczewkę, z którą będą pracować.
Patrząc przez okular poruszając płaskim zwierciadłem uzyskujemy w tych warunkach najlepsze warunki oświetleniowe. Następnie zamknij całkowicie przysłonę iluminatora. Jeśli w tym samym czasie jej obraz opuści pole widzenia, należy go zwrócić, przesuwając lustro. Podnosząc lub opuszczając kondensor starają się, aby obraz przysłony oświetlacza był ostry. Określa to optymalną wysokość kondensora podczas współpracy z danym obiektywem (przy pracy z obiektywami o małym powiększeniu należy odkręcić górną soczewkę kondensora, aby skoordynować jego pracę z możliwościami obiektywu). Przy zmianie obiektywu obraz zamkniętej przysłony oświetlacza należy ponownie ustawić w płaszczyźnie ogniskowej obiektywu.
Przesuwając lustro, obraz przysłony oświetlacza zostaje przeniesiony na środek pola widzenia. Jeżeli krawędzie obrazu mają różną kolorystykę (jeden biegun jest niebieskawy, drugi czerwonawy), oznacza to, że oś oświetlacza jest nachylona do płaszczyzny pionowej mikroskopu. Obserwując przez okular, poruszaj oświetlaczem ręcznie tak, aby barwa krawędzi obrazu była jednakowa na całym jego obwodzie. Oświetlenie pola widzenia staje się równomierne na całym obszarze. Pozostaje tylko otworzyć przysłonę oświetlacza tak, aby jego obraz wpasował się dokładnie w pole widzenia danego obiektywu. W takim przypadku strumień świetlny zostanie w pełni wykorzystany i nie będzie nadmiaru wiązek światła, które mogłyby powodować zakłócenia w obrazie. Teraz za pomocą reostatu zmieniającego napięcie zasilania oświetlacza, natężenie lampy ustawia się na takim poziomie, aby oko nie męczyło się nadmierną jasnością i z łatwością było w stanie dostrzec najdrobniejsze szczegóły.
Zainstalowanie oświetlenia Köhler jest warunkiem kwalifikowanej pracy z mikroskopem. Naruszenie prawidłowego oświetlenia nieuchronnie prowadzi do utraty rozdzielczości i kontrastu oraz do błędów optycznych, szczególnie w mikrofotografii i mikrokinie.
Nowoczesne mikroskopy wyposażone są w różnorodne urządzenia do automatycznej i półautomatycznej instalacji oświetleniowej. Ich zastosowanie ułatwia montaż oświetlenia, jednak nie zastępuje metody Köhlera. Na podstawie standardowego oświetlenia Kohlera, po wykonaniu kilku dodatkowych operacji, ustala się działanie wszystkich pozostałych typów mikroskopów. Tak więc, aby np. przejść na mikroskopię ciemnego pola, po zainstalowaniu standardowego oświetlenia należy wymienić zwykły kondensor na kondensor ciemnego pola (bez zmiany położenia pozostałych elementów mikroskopu) i obserwując przez okular , powoli go podnoś, aż pojawi się obraz ciemnego pola – błyszczące cząstki obiektu na prawie czarnym tle. Szkiełko do mikroskopii w ciemnym polu musi mieć grubość 1-1,2 mm, w przeciwnym razie kondensor nie będzie w stanie skupić światła na obiekcie.
Przejście do mikroskopii z kontrastem fazowym jest nieco bardziej skomplikowane. Kondensator urządzenia z kontrastem fazowym ma bęben w płaszczyźnie ogniskowej z zestawem pierścieniowych przesłon o różnych rozmiarach (patrz ryc. 2 w artykule „Mikroskopia”). Liczby pojawiające się w okienku bębna po jego obróceniu pokazują jaki obiektyw (x10, x20, x40 czy x90) zastosować z przysłoną, której wartość jest w danej chwili widoczna w okienku; liczba O oznacza brak membrany (praca skraplacza w trybie normalnym). W tej pozycji instalowane jest standardowe oświetlenie. Następnie soczewka przeznaczona do użycia skupiana jest na preparacie.
Obraz jest zwykle bardzo słabo widoczny, ale trzeba go wyostrzyć. Obracając bęben, instaluje się żądaną membranę pierścieniową. Zamiast okularu wkładany jest pomocniczy mikroskop, który znajduje się w zestawie urządzenia z kontrastem fazowym. Ułatwia to obserwację obszaru, na którym powstaje obraz.
Poruszając okularem tego mikroskopu, uzyskuje się wyraźną widoczność dwóch pierścieni o różnej gęstości, znajdujących się głęboko w tubusie mikroskopu. Jedna z nich jest utworzona przez pierścieniową szczelinę w membranie skraplacza; druga to tzw. płytka fazowa – półprzezroczysty pierścień ze specjalnej powłoki nałożonej na jedną z soczewek obiektywu. Obrazy tych pierścieni z reguły nie pokrywają się ze sobą. Przesuwając śruby centrujące znajdujące się pod bębnem, przesuwamy membranę tak, że jej obraz całkowicie pokrywa się z płytką fazową. Następnie mikroskop pomocniczy zostaje zastąpiony konwencjonalnym okularem i rozpoczyna się obserwacja obrazu z kontrastem fazowym.
W przybliżeniu te same techniki można zastosować do uzyskania kontrastu amplitudowego w mikroskopach typu kontrastu amplitudowego (anoptralnego).
Po zmianie preparatu należy sprawdzić, czy warunki oświetleniowe pozostały takie same, gdyż grubość szkiełek jest zmienna i płaszczyzna obiektu może nie pokrywać się z ustaloną wcześniej płaszczyzną ogniskowania kondensora. Aby to sprawdzić należy zamknąć przysłonę iluminatora. Jeśli jego obraz przy obiektywie skupionym na nowym leku okaże się nieostry, należy zmienić wysokość kondensora, a następnie ponownie otworzyć przysłonę do wielkości pola widzenia.
Mikroskopię najlepiej wykonywać przy użyciu nasadki lornetkowej; rozkłada lekkie obciążenie na oba oczy, co skutkuje mniejszym zmęczeniem podczas długotrwałej pracy.
Pomimo znacznego postępu w mikrofotografii i mikrofilmografii w ostatnich latach, maszyny rysujące pozostają bardzo przydatne podczas pracy z grubymi, wielopłaszczyznowymi obiektami, których nie da się sfotografować ze względu na dużą głębokość. Przemysł produkuje ciągarkę RA-4, której obsługa nie sprawia żadnych trudności. Sprzęt do mikrofotografii (przystawka do mikrofotografii MFN itp.) jest prosty, niedrogi i łatwy w użyciu. Uzyskanie wysokiej jakości mikrofotografii wymaga jednak dużej praktyki.
Po zakończeniu pracy z mikroskopem należy go osłonić przed kurzem. Jeżeli korzystałeś z soczewki immersyjnej, należy ostrożnie wytrzeć olejek cedrowy czystą dłonią, a jego ślady z przedniej soczewki soczewki zmyć czystą szmatką lekko zwilżoną benzyną lub ksylenem (nie zwilżać jej zbyt mocno, gdyż substancje mogą rozpuścić klej łączący soczewkę).
Zasady pielęgnacji mikroskopu opisano w jego instrukcji.
Bakterioskopia- jest to badanie bakterii przy użyciu mikroskopu świetlnego - jest szeroko stosowane w praktyce medycznej. Utrwalone preparaty barwione, a także żywe bakterie w preparatach kroplowych „wiszących” lub „rozgniecionych” (patrz Kropla wisząca, Kropla rozdrobniona) poddawane są badaniu bakterioskopowemu (patrz Badanie bakteriologiczne).
Wykonywanie preparatów mikroskopowych - patrz Technologia bakteriologiczna. Badania bakteriologiczne, Badania wirusologiczne, Technika histologiczna. Istnieje jeden ogólny wymóg dla każdej próbki mikroskopowej: grubość szkiełka nie powinna przekraczać 1,2-1,4 mm, szkiełko nakrywkowe - 0,4 mm.
Załadunek...